DNA采血卡片：药物遗传学研究中DNA产量和质量的决定因素（3）

样本收集：为规范比较，不直接从指尖穿刺采集血斑。相反，一滴10毫升的血液(通过静脉穿刺收集)被放置在指尖进行血斑检查。每个DNA采血卡上收集4滴(每滴10微升)。采用乙二胺四乙酸(EDTA)(乙二胺四乙酸(EDTA然后，我们取不同浓度的10毫升，在相应的卡片上用EDTA来获取血斑，使用两种类型的DNA采血卡(等码卡)执行了相同的协议。®或FTA经典卡®)当卡片装满后，这些水滴会在室温下一夜干燥，并储存在装有干燥剂包的密封塑料袋中，以避免潮湿，并保护它们不受光线的影响。每位志愿者填写了几张DNA卡，以便在不同温度(室温、-20°C和-80°C)和不同时间(1周、2个月和1年)进行观察，在不同标准条件得室温下保存两个月，不含EDTA。

DNA洗脱等码卡®DNA是通过修改制造商的指令来提取的。使用纸打孔机，将0.125英寸(3.2mm)圆盘从含有干血的完整卡片基体区域打孔。在连续使用期间，打孔机先用酒精和火焰进行消毒，然后再通过干净的滤纸进行几次冲孔。将3个含干血的圆盘放入1.5毫升的试管中，在80℃的烤箱中加热20分钟。为了去除污染物，圆盘用500毫升的水洗了两次，漩涡三次，持续5秒。清洗盘被转移到一个新的管和增加40升的水。冷冻保存前，在100°C下孵育15 min。从卡片矩阵中提取DNA。脉冲涡旋60次左右，离心1 min.13，000×g。用塑料钳取出基质盘，并将其挤压在管子的一侧以去除多余的水分，洗脱DNA上清液保存于-20°C，经干燥和室温保存后再分离：我们将已经分离的3.2mm光盘烘干，再进行新的分离。

FTA经典卡®. 三个3.2毫米光盘是使用相同的协议获得的等码卡。®。DNA是根据制造商的指示提取的，并作了一些修改。将3个含干血的圆盘放入1.5毫升的试管中，在80℃的烤箱中加热15-20分钟。在每种FTA纯化试剂200μl中进行三次洗涤，在室温下孵育5 min。在TE-1缓冲液(10 mm Tris-HCl，0.1mm EDTA，pH8.0)中进行两次洗涤，然后在室温下干燥1小时或10 min。在60°C下，加入102l的pH13溶液(0.1NNaOH，0.3mEDTA)，孵育5 min。随后加入198μl的pH7溶液(0.1M-Tris-HCl)，多次倒置管，使圆片保持在溶液中。样品经过5 min的涡旋处理。然后在室温下离开10分钟。将上清液转移到新的无菌管中，在-20°C下保存，干燥后在室温下保存，进行再分离。

DNA定量含有纯化的单链dna(Ssdna)的单链dna(Ssdna)。®和FTA经典卡®在-80°C下定量保存，直至使用。使用光谱荧光仪(以日立牌机器为例)，按OligreenssDNA定量试剂盒(分子探针，Invitrogen，Carlsbad，CA，USA)测定ssDNA产量。

血红蛋白浓度血红蛋白是从血液中纯化的DNA样品中的主要污染物，被用作评价纯化方案的标记物。每个DNA样本被稀释(1/10)，用分光度计(Cecil 2100，Tovatech，South Orange，NJ，USA)在405 nm处读取吸光度。

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