DNA采血卡片:药物遗传学研究中DNA产量和质量的决定因素(4)
DNA采血卡片:药物遗传学研究中DNA产量和质量的决定因素(4)
基因分型方法:
多重PCR和单核苷酸引物延伸(Snupe)。3种CYP2C9基因多态性(CYP2C9*2,*3和5‘-侧翼区C-1189T多态性)均以已发表的方法同时进行,基因分型使用ABI棱镜®快照TM多重试剂盒(应用生物系统,福斯特市,加利福尼亚州,美国)。
等位基因识别法(TaqMan)®): 本文对5-羟色胺受体4基因型(rs 1345697(应用生物系统c_11267705_10)和rs 980062(应用生物系统_7505278_10)进行了基因型分析(应用生物系统)。
全基因组扩增(WGA):为了扩增基因组DNA,我们遵循了制造商的指示(GenomiPhone DNA扩增试剂盒,阿默沙姆生物科学,英国白金汉郡)。
采血卡统计数字:计算DNA恢复率,考虑血液学特征值(白细胞计数),假设每盘血液3 1,每白细胞6 pg DNA,100 %DNA产率用单向比较了两张卡的多个参数,诺瓦(差异分析),P≤0.05有统计学意义。为了比较起见,我们定义为标准条件,室温下储存两个月,不含EDTA。统计分析采用SPSS11.0版(芝加哥,美国)。
结果 使用这两张DNA采血卡获得的DNA数量在每种存储条件下都是相同的时间、温度和EDTA对等码卡的影响不显著。®或FTA经典卡®。虽然差异不大,但FTA经典卡的DNA产量®在不含EDTA的情况下,呈明显下降趋势。在等码卡中®血样干燥时间对保证DNA质量极为重要。当在第 一周进行分离时,洗脱DNA中的血红蛋白浓度很高。事实上,在这种血红蛋白浓度下,DNA扩增过程受到了控制(数据未显示)。为了避免这种情况,血液斑点必须干燥不少于1周。此外,如果洗两次而不是一次,血红蛋白浓度应降低(即在洗脱程序的第 一步)此外,为了确保血斑被彻底干燥,我们在洗脱之前加热了DNA采血卡。FTA经典卡没有遇到这个问题®,虽然烘箱预洗脱步骤也同样进行。
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