DNA采血卡与口腔细胞卡

本文介绍一种用DNA采血卡技术从口腔细胞和全血中提取DNA的方法，采用甲醇固定和洗脱PCR程序。根据基于PCR的基因分型，提取的DNA在质量上与已发表的WhatmanFTA协议相当.从干燥样品中洗脱DNA是已发表的Whatman FTA协议中已知的限速步骤，该方法允许在几个PCR反应中使用样品的每个3毫米穿孔，而不是标准的每个样品穿孔一次PCR反应。因此，这一优化方案扩大了每个收集的口腔拭子样本的用途和成本效益，用于核酸PCR和基因分型。

惠特曼、FTA、DNA采血卡与无菌泡沫喷头结合，用于无痛收集松散的内颊(颊)细胞，包括那些漂浮在唾液中的细胞。DNA采血卡技术可防止基因组DNA在室温下降解，长期存档后可进行PCR扩增。为了进行分析，从干样品区打出一个小圆盘。

Watman标准协议要求光盘在FTA净化试剂(CAT)中清洗，干燥，和整个样品盘，然后直接纳入PCR扩增反应。这些协议不调整反应体积或PCR条件以适应光盘的存在

研究发现，唾液样本的使用是血液样本的一种很好的替代方法。获得高质量的基因组DNA，它们的使用大大提高了流行病学研究中的应答率。理论上讲，口腔细胞比血液每体积产生更多的DNA产物。随着稳定性的提高和收集过程中不感到不适，它们正在成为选择的样本，允许在任何现场情况下容易收集。然而，耗时的样本穿孔过程是一个已知的限速步骤，如果一个特定的分析需要多个样本准备。这方面的另一个问题是生物样品的消耗相对较快。DNA提取过程中的甲醇固定曾经用于保存在Guthrie卡上的血样。值得注意的是，不同的固定技术对染色质超微结构和dna提取的影响表明，使用甲醇固定剂.

我们首次用改进的甲醇固定法从Whatman FTA经典卡片上收集到的口腔细胞中进行DNA洗脱。这样可以缩短样品处理时间，增加每次打孔的PCR反应次数。

经修订后的方法与标准的Whatman FTA协议进行了比较，该协议既适用于Whatman FTA经典卡上的颊细胞(存储0至1年)，也用于1 mm Whatman bfc 180滤纸采血卡上的血斑(存储2至5年)。